Полученную крупнозернистую взвесь повторно измельчают еще 2-3 раза с промыванием после каждого измельчения раствором Хенкса (без индикатора) с антибиотиком и средой 199 (с феноловым красным). Образовавшуюся мелкозернистую гомогенную массу (в виде манной крупы) переносят в матрасные колбы и заливают 120 мл среды для культивирования 199 с 10 % сыворотки плодов крупного рогатого скота и раствором антибиотика в дозе 100 мкг/мл. Культивирование проводят в термостате при температуре плюс 37°С. Каждые 2-3 дня выполняют смену культуральной среды. На 3-4 сутки переносят колбы в термостат с температурой плюс 24°С. По истечении 7-8 суток культура пригодна для трансплантации. В процессе культивирования забирают часть материала для гистологического и бактериологического исследования, культуральную жидкость исследуют на содержание С-пептида и инсулина. Помутнение культуральной среды, изменение ее рН, а также образование пузырьков газа или явный визуальный рост колоний говорят о бактериальной загрязнении и гибели культуры, что делает ее использование недопустимым.
Сбор готовой культуры для трансплантации выполняют в ламинарном боксе. Из матрасной колбы пипеткой отсасывают вначале культуральную среду, а затем культуру островковых клеток, которая представляет из себя гомогенную взвесь белесоватого цвета. Последнюю после промывания раствором Хенкса с антибиотиком помещают в стерильный флакон и над спиртовкой плотно закрывают резиновой пробкой. Полученная культура (5-7 мл гомогенной взвеси) может храниться в холодильнике при температуре плюс 40°С в течение 24 часов.